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細(xì)胞培養(yǎng)過程中遇到的常見問題及解決的辦法

發(fā)布日期: 2022-09-23
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  細(xì)胞培養(yǎng)過程中遇到的常見問題及解決的辦法:
  
  1、培養(yǎng)液pH值變化太快:
  
  (1)CO2張力不對(duì);培養(yǎng)瓶蓋擰得太緊;NaHCO3緩沖系統(tǒng)緩沖力不足;培養(yǎng)液中鹽濃度不正確。細(xì)菌、酵母或真菌污染。按培養(yǎng)液中NaHCO3濃度增加或減少培養(yǎng)箱內(nèi)CO2濃度,2.0g/L到3.7g/L濃度NaHCO3對(duì)應(yīng)CO2濃度為5%到10%。
  
  (2)改用不依賴CO2培養(yǎng)液。松開瓶蓋1/4圈。加HEPES緩沖液至10到25mM終濃度。在CO2培養(yǎng)環(huán)境中改用基于Earle’s鹽配制的培養(yǎng)液,在大氣培養(yǎng)環(huán)境中培養(yǎng)改用Hank’s鹽配制的培養(yǎng)液。丟棄培養(yǎng)物或用抗生素除菌。
  
  2、培養(yǎng)液出現(xiàn)沉淀,但pH值不變:
  
  用洗滌劑清洗后殘留磷酸鹽將培養(yǎng)基成分沉淀下來。冰凍保存培養(yǎng)液。用去離子水反復(fù)沖洗玻璃器皿,然后除菌。將培養(yǎng)液加熱到37℃,搖動(dòng)使其溶解如沉淀仍然存在,丟棄培養(yǎng)液。
  
  3、細(xì)胞培養(yǎng)液出現(xiàn)沉淀,同時(shí)pH發(fā)生變化:
  
  細(xì)菌或真菌污染//丟棄培養(yǎng)物或用抗生素除菌。
  
  4、培養(yǎng)細(xì)胞不貼壁:
  
  胰蛋白酶消化過度;支原體污染;培養(yǎng)液中無貼壁因子。縮短胰蛋白酶消化時(shí)間或降低胰蛋白酶濃度。分離培養(yǎng)物,檢測支原體。清潔支架和培養(yǎng)箱。如發(fā)現(xiàn)支原體污染,丟棄培養(yǎng)物。
  
  5、懸浮細(xì)胞成簇:
  
  細(xì)胞培養(yǎng)液中含鈣、鎂離子。支原體污染。蛋白酶過度消化使得細(xì)胞裂解釋放DNA。用無鈣鎂平衡鹽溶液洗滌細(xì)胞,輕輕吹吸細(xì)胞獲得單細(xì)胞懸液。分離培養(yǎng)物,檢測支原體。如發(fā)現(xiàn)支原體污染,丟棄培養(yǎng)物。用DNase處理細(xì)胞。
  
  6、原代細(xì)胞培養(yǎng)物污染:
  
  原代培養(yǎng)組織在進(jìn)入培養(yǎng)前已污染。培養(yǎng)前用含高濃度抗生素的平衡鹽溶液反復(fù)沖洗組織。
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